一、服務介紹
(完整載體資訊請點選此連結)
(GenScript 亦提供 human 和 mouse 全基因的 gRNA 質體圖庫,請點選此連結)
表一:五種 Cas9 系統比較
系統名稱 | *作用方式 | 應用 | 說明 |
SpCas9 | DSB | 一般使用 | 最早應用於基因編輯的 CRISPR 系統,來自於 S. pyogenes 的 type II CRISPR 系統。 |
eSpCas9 | DSB | Off-Target 較低 | 為 SpCas9 經過三個點突變 (K848A, K1003A, R1060A),可以減少 non-target DNA 的結合,大幅提高專一性。 |
SpCas9 Nickase (Cas9nD10A) | SSB | 使用上必須同時引入兩段 gRNA,Off-Target 較低 | 為 SpCas9 經過一個點突變 (D10A),此突變會導致 Cas9 只能進行單股核酸裁切 (SSB)。使用上必須同時引入兩段 gRNA,辨認鄰近的區域 (需要是 DNA 雙股各一股),造成兩個鄰近的單股 DNA 斷裂,才能夠引發 NHEJ,造成基因缺失,因此可以大幅度降低 off-target,增加專一性。 |
SaCas9 | DSB | Cas9 蛋白質較小,AAV 包裝專用 | 來自於 Staphylococcus aureus,作用效率和 SpCas9 差不多,但是 SaCas9 蛋白質較小 (少1 kb DNA),較適合 Adeno-Associated Virus (AAV) 包裝。 |
Transcription Activation (SAM) Plasmids | SAM | 去除活性的 Cas9 (dCas9),接上 Transactivation protein,用來專一性地促進特定基因表現 | 為特殊的 CRISPR 系統,其中 Cas9 透過突變而失去核酸裁切的功能 (dCas9),同時又接上 transactivation protein (VP64),sgRNA 也經過特別設計 (加上 two MS2 RNA aptamers),用來專一性地促進特定基因表現。 |
二、服務應用
1. 針對目標基因做 knockin 或 knockout:
SpCas9, eSpCas9, SpCas9 nickase, SaCas9 皆能夠造成 DNA 雙股或單股斷裂,其中 SaCas9 適用 AAV 系統,而 SpCas9 nickase 只能造成 DNA 單股斷裂,比較資訊請參考表一。
2. 針對目標基因促進基因表現:
SAM 系統不會造成 DNA 損傷,失去活性的 Cas9 蛋白質會帶著 transactivation protein,因此反而會促進基因表現,比較資訊請參考表一。
三、服務優點
1. 免費 gRNA 資料庫:
GenScript 和張鋒實驗室共同合作 (Feng Zhang’s laboratory at the Broad Institute of MIT and Harvard),免費提供 gRNA 資料庫,資料庫中的 gRNA 序列皆已經過驗證,能夠有效地針對目標基因,讓您放心做選擇。(免費 gRNA 資料庫請點選此連結)
2. 提供 gRNA 庫存質體,最快一週到貨:
原廠提供超過 20,000 條 gRNA 庫存質體 (預設載體為 pLentiCRISPR v2),下訂後可於一週到貨。
3. 多種 Cas9 系統選擇:
五種 Cas9 系統選擇,SpCas9, eSpCas9, SpCas9 nickase, SaCas9, SAM,對應三種作用方式 (表一)。
4. 多種載體型式可選擇:
多種載體型式可選擇 [轉染用、慢病毒系統 [all-in-one 或 dual vector (gRNA 和 Cas9 分開]、AAV 系統] (完整載體資訊請點選此連結)。
四、服務方案
(1) 基因名稱 (Gene symbol/ID) or gRNA 序列
(2) 指定載體
2. 出貨規格:
(1) 4 ug 凍乾質體
(2) 定序結果