ssDNA synthesis (長片段單股DNA合成)-CRISPR Services (基因編輯服務)-盟基生物科技股份有限公司

CRISPR 被稱為第三代基因編輯技術，相較於先前的 TALEN 與 ZFN 系統而言，CRISPR 操作更簡單，且成功率更高。Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) and CRISPR-associated protein (Cas) 為細菌特殊的免疫系統，保護細菌免受病毒感染。CRISPR 技術是由 Cas9 蛋白質透過 gRNA 和目標基因的鹼基配對互補性，專一性結合目標基因染色體 DNA，並進行雙股裁切 (double strand break, DSB)。而發生 DSB 的染色體會以兩種方式修復，NHEJ (non-homologous end joining) 容易造成基因功能缺失 (knockout)，而 HDR (homology-directed repair) 引入 ssDNA template 則可以插入或置換特定序列 (knockin) (圖一)。鹼基配對的特性使得 CRISPR 專一性更高，操作和設計更簡單，因此被廣泛應用於基因工程領域。GenScript 提供 ssDNA synthesis 長片段單股 DNA 合成服務，比 Plasmid DNA 和 dsDNA 效率更高且毒性較低。

一、服務介紹

針對 CRISPR 實驗中的 knockin (圖一)，GenScript 提供高品質的 ssDNA，最大長度可到5000鹼基，讓您能輕鬆地置換染色體中的基因片段。

圖一：發生 DSB 的染色體會以兩種方式修復，其中 HDR (homology-directed repair) 方式會引入 ssDNA template 來修復，實驗者透過外加人工合成的 ssDNA，則能夠在目標基因中插入或置換特定序列 (knockin)。

二、服務應用
高品質的單股 DNA (ssDNA)，能夠針對目標基因做 knockin。

三、服務優點
1. 優於 Plasmid DNA 和 dsDNA：
相比於實驗室自己置備的質體 (plasmid DNA)，或是進行 PCR 得到的雙股 DNA (dsDNA)，Genscript 提供的 ssDNA 毒性更低，效率更好 (表一)。

表一：Plasmid DNA, dsDNA, ssDNA 當作 Knockin HDR donor 特性比較

Knockin donor	Plasmid DNA	dsDNA	ssDNA
方便性	++	+	+++
HDR 效率	++	+++	+++++
Off-target 機率	++	+++	+
毒性	+++	+++	+

2. 兩輪定序確保序列 100% 正確
3. 低化學物質殘留，直接實驗不害怕
4. 無 dsDNA 汙染 & DNA base damage
5. 專業合成技術可到 5000 nt (需評估序列)
6. 優於 I 牌：
雖然 Genscript ssDNA 合成服務上市時間較 I 牌晚，但是價格、長度、產量和交期上都具有優勢 (I 牌只能到2000鹼基)。另外，Genscript 也能提供較為複雜的序列。許多美國客戶都是因為 I 牌無法合成，轉於 Genscript 後非常滿意，而後形成長期和穩定的合作。

四、服務方案

1. 客戶提供：
(1) ssDNA 序列
(2) 產量

2. 出貨規格：
(1) 凍乾 ssDNA
(2) 定序報告
(3) 純度測試報告 (by gel electrophoresis)

ssDNA synthesis (長片段單股DNA合成)-CRISPR Services (基因編輯服務)-盟基生物科技股份有限公司

CRISPR Services (基因編輯服務)

ssDNA synthesis (長片段單股DNA合成)

ssDNA synthesis (長片段單股DNA合成)

使用於基因置入 (knockin)，比 Plasmid DNA 和 dsDNA 效率更高且毒性較低。