Stable cell line (細胞株建構)-盟基生物科技股份有限公司

CRISPR 被稱為第三代基因編輯技術，相較於先前的 TALEN 與 ZFN 系統而言，CRISPR 操作更簡單，且成功率更高。Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) and CRISPR-associated protein (Cas) 為細菌特殊的免疫系統，保護細菌免受病毒感染。CRISPR 技術是由 Cas9 蛋白質透過 gRNA 和目標基因的鹼基配對互補性，專一性結合目標基因染色體 DNA，並進行雙股裁切 (double strand break, DSB)。而發生 DSB 的染色體會以兩種方式修復，NHEJ (non-homologous end joining) 容易造成基因功能缺失 (knockout)，而 HDR (homology-directed repair) 引入 ssDNA template 則可以插入或置換特定序列 (knockin)。鹼基配對的特性使得 CRISPR 專一性更高，操作和設計更簡單，因此被廣泛應用於基因工程領域。GenScript 提供 CRISPR stable cell line 細胞株建構服務，讓您省去大量時間和人力。

一、服務介紹

GenScript 和張鋒實驗室共同合作 (Feng Zhang’s laboratory at the Broad Institute of MIT and Harvard)，可以幫您設計專屬的 gRNA，並直接完成穩定細胞株建構，節省您的時間和人力。除了基因缺失 (knockout) 之外，Genscript 也能夠進行困難的基因插入 (knockin)，比較請見表一，完整方案請洽詢盟基。

表一：穩定細胞株建構方案比較

服務名稱	方式	gRNA 送入細胞方式	細胞選擇	出貨規格	交期**
Knockout Cell Pool Service	單一基因 knockout	Lentivirus-based	任何細胞株	(1) Stable cell pool (2) 染色體 DNA 定序報告	5-11 週
EZ Knockout Cell Line Service*	單一基因 knockout	Transfection-based	120種以上適合轉染的細胞	(1) 兩株成功 knockout 細胞 (2) 一株陰性控制組細胞 (3) 染色體 DNA 定序報告	10-19 週
Customized Knockout Cell Line Service	複數基因 knockout	Transfection-based, Lentivirus-based, RNP-based	任何癌細胞株	(1) 1-2株成功 knockout 細胞 (2) 一株陰性控制組細胞 (3) 染色體 DNA 定序報告	16-24 週
Customized Knockin Cell Line Service	任何指定位置插入片段或置換序列	Transfection-based, RNP-based	120種以上適合轉染的細胞	(1) 一株成功 knockin 細胞 (2) 一株陰性控制組細胞 (3) 染色體 DNA 定序報告	14-24 週

*須由原廠評估是否符合 EZ Knockout Cell Line Service 方案。
**根據案件複雜程度 (目標基因和細胞) 會有不同的交期。

二、服務應用
針對目標基因做 knockin 或 knockout，直接得到細胞株，進行後續實驗。

三、服務特色
1. 提供整套服務：
從 gRNA 設計、建構質體、引入細胞到單一細胞株建構和鑑定，一應俱全，全部包辦，不須客戶擔心。

2. 可加購條件測試：
包括 Promoter 和轉染條件優化 (Promoter activity survey, Transfection optimization)。

3. 可加購其他測試分析：
除了序列比對分析之外，還可其他測試，包括 qPCR、Western blotting、FACS analysis、Off-target analysis。

Stable cell line (細胞株建構)-盟基生物科技股份有限公司

CRISPR Services (基因編輯服務)

Stable cell line (細胞株建構)

Stable cell line (細胞株建構)

直接建構完 CRISPR knockout/knockin 細胞株，省去大量時間和人力。