Cas9 enzyme (酵素)-Molecular Biology-盟基生物科技股份有限公司

全基因合成線上訂單系統
蝦皮賣場
  1. 首頁
  2. 試劑藥品
  3. Molecular Biology
  4. CRISPR
  5. Cas9 enzyme (酵素)

CRISPR

Cas9 enzyme (酵素)

Cas9 enzyme (酵素)

CRISPR

Cas9 enzyme (酵素)

用於 in vitro gRNA 篩選和 RNP 系統，高純度、低內毒素、生物活性經過確認！

點我詢問
CRISPR 被稱為第三代基因編輯技術，相較於先前的 TALEN 與 ZFN 系統而言，CRISPR 操作更簡單，且成功率更高。Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) and CRISPR-associated protein (Cas) 為細菌特殊的免疫系統，保護細菌免受病毒感染。CRISPR 技術是由 Cas9 蛋白質透過 gRNA 和目標基因的鹼基配對互補性，專一性結合目標基因染色體 DNA，並進行雙股裁切 (double strand break, DSB)。而發生 DSB 的染色體會以兩種方式修復，NHEJ (non-homologous end joining) 容易造成基因功能缺失 (knockout)，而 HDR (homology-directed repair) 引入 ssDNA template 則可以插入或置換特定序列 (knockin)。鹼基配對的特性使得 CRISPR 專一性更高，操作和設計更簡單，因此被廣泛應用於基因工程領域。Genscript 提供 Cas9 enzyme，用於 in vitro 檢測和 RNP 系統。

一、產品介紹
Cas9 enzyme 有兩種應用，一為 in vitro gRNA 篩選。進行 CRISPR 實驗時，針對的目標基因通常有多條 gRNA 選擇，因此可先於 in vitro 測試，篩選出編輯效率較高的組別，再進行細胞內 in vivo 測試。In vitro 測試需要目標基因 PCR product、純化的 Cas9 enzyme 和 gRNA。除了 Cas9 enzyme 之外，Genscript 也有提供高品質的 gRNA 合成服務，詳細資訊請點我。除此之外，Genscript 還提供 sgRNA 篩選套組 GenCrispr sgRNA Screening Kit (#L00689)，包含 control 和詳細的步驟，詳細資訊請點我。
另一應用為 Ribonucleoprotein (RNP) system，CRISPR 實驗可由轉染或病毒方式 (Plasmid/Lentivirus) 送入 DNA (點選我可連結至 CRISPR plasmid)，讓細胞自己表現 Cas9 蛋白和 gRNA。另外一種方式則為 RNP system (圖一)，直接送入 Cas9 蛋白和 gRNA 進入細胞。操作 RNP system 時需要 Cas9 蛋白質和 gRNA，使用 RNP 最大的好處在於沒有外源的 DNA，因此可大幅度地降低突變機率。除此之外，相較於 plasmid DNA，蛋白質和 RNA 可直接產生作用，不需花費時間轉錄和轉譯，因此進入細胞後可較快速地引發基因編輯。並且由於是蛋白質和 RNA，因此比較快被細胞清除，off-target 機率也會大幅度地降低 (表一)。
圖一：RNP 示意圖，直接將 Cas9 蛋白質和 gRNA 送入細胞中，可以更快速地引發基因編輯，且能降低突變機率。


表一：Plasmid/Lentivirus 和 RNP system 對於 CRISPR 實驗的影響  
CRIPSR 送入方式 Plasmid/Lentivirus RNP system
種類 DNA Protein & RNA
作用速度 慢 快
作用時間 長 短
Off-target 機率 高 低
DNA 突變機率 高 低
 

二、產品優點
1. 高生物活性：
每一批次的 Cas9 enzyme 皆經過 in-vitro 或 in-vivo assays 測試，確保酵素有活性。
圖二：以 EcoRV-linearized pUC57 plasmid DNA 加入對應的 gRNA，和不同量的 GenCrispr Cas9 Nuclease (#Z03386) 作 in vitro 測試。反應適當的時間之後，以 1% agarose gel 分析。最上面的訊號為 wild-type DNA，中間兩條代表 Cas9 成功作用，裁切成兩條。Lane3-5 最下方的訊號為 gRNA。 圖三：Genscript Cas9 enzyme in vivo 活性高於他牌。將不同廠牌的 Cas9 enzyme 和 gRNA 送入 THP1 細胞 (electroporation) 作 In vivo 測試。48小時候裂解細胞，進行 T7E1 assay 分析。最上面的訊號為 wild-type DNA，下方兩條訊號代表 CRISPR 成功，T7E1 裁切成兩段 DNA。Lane 1, gRNA + GenCrispr Cas9-N-NLS Nuclease (#Z03468); Lane 2, gRNA + Merck; Lane 3, gRNA + IDT; Lane 4, gRNA + Thermo; Lane 5, negative control; Lane 6, marker。


2. 蛋白連接 nuclear localization signal (NLS)，幫助 Cas9 蛋白進入細胞核：
提供 N 端、C 端、兩端接上 NLS 的 Cas9 enzyme，三者的基因編輯效率差不多，據 Genscript 原廠統計，#Z03469 (兩端皆有 NLS) 銷售量最多。

3. > 95% 高純度 (by SDS-PAGE)
4. 低內毒素 (<0.1 EU/ug)
5. 無 RNase & DNase 汙染


三、產品資訊

表二：訂購資訊
類別 產品名稱 包裝 貨號
In vitro  target DNA cleavage GenCrispr Cas9 Nuclease  10 ug (0.2 mg/mL) Z03386-10
50 ug (0.2 mg/mL) Z03386-50
Nuclear localization and  in vivo  gene-editing Double strand break (DSB) GenCrispr Cas9-C-NLS Nuclease  50 ug (1 mg/mL) Z03385-50
100 ug (4 mg/mL) Z03385-100
GenCrispr Cas9-N-NLS Nuclease  100 ug (10 mg/mL) Z03468-100
500 ug (10 mg/mL) Z03468-500
1 mg (10 mg/mL) Z03468-1
GenCrispr NLS-Cas9-NLS Nuclease  100 ug (10 mg/mL) Z03469-100
500 ug (10 mg/mL) Z03469-500
1 mg (10 mg/mL) Z03469-1
GenCrispr NLS-Cas9-EGFP Nuclease  100 ug (10 mg/mL) Z03467-100
500 ug (10 mg/mL) Z03467-500
1 mg (10 mg/mL) Z03467-1
GenCrispr eSpCas9-N-NLS Nuclease  100 ug (4 mg/mL) Z03470-100
300 ug (4 mg/mL) Z03470-300
Single strand break (SSB) GenCrispr NLS-Cas9-D10A Nickase  10 ug (1 mg/mL) Z03390-10
50 ug (1 mg/mL) Z03390-50
100 ug (4 mg/mL) Z03390-100


四、相關服務
1. sgRNA合成服務 (詳細資訊請點我)
2. ssDNA 合成服務 (詳細資訊請點我)
3. CRISPR 細胞株建構服務 (詳細資訊請點我)
 

加入好友