Kit (套組)-Molecular Biology-盟基生物科技股份有限公司

CRISPR

Kit (套組)

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CRISPR

Kit (套組)

三種套組:sgRNA 製備、sgRNA 篩選以及 DNA 突變偵測!

CRISPR 被稱為第三代基因編輯技術,相較於先前的 TALEN 與 ZFN 系統而言,CRISPR 操作更簡單,且成功率更高。Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) and CRISPR-associated protein (Cas) 為細菌特殊的免疫系統,保護細菌免受病毒感染。CRISPR 技術是由 Cas9 蛋白質透過 gRNA 和目標基因的鹼基配對互補性,專一性結合目標基因染色體 DNA,並進行雙股裁切 (double strand break, DSB)。而發生 DSB 的染色體會以兩種方式修復,NHEJ (non-homologous end joining) 容易造成基因功能缺失 (knockout),而 HDR (homology-directed repair) 引入 ssDNA template 則可以插入或置換特定序列 (knockin)。鹼基配對的特性使得 CRISPR 專一性更高,操作和設計更簡單,因此被廣泛應用於基因工程領域。Genscript 提供 CRISPR 三種套組,用於 sgRNA 製備、sgRNA 篩選以及 DNA 突變偵測。

一、產品介紹
1. GenCrispr sgRNA Synthesis Kit:
此套組用於製備含 T7 promoter 的 sgRNA DNA 模板,並進行體外轉錄 (in vitro transcription, IVT),製作出 sgRNA。首先必須先以圖一的方式設計出 Target F1 primer 和 R1 primer,並透過 PCR 方式組合出 DNA template。最後以體外轉錄的方式製備出 sgRNA。
圖一:GenCrispr sgRNA Synthesis Kit (#L00694) 作用示意圖。實驗者必須先針對目標基因設計 Target F1 primer 和 R1 primer,並根據操作步驟組合出 DNA template。


2. GenCrispr sgRNA Screening Kit:
此套組用於細胞實驗前,於體外快速篩選適合的 sgRNA 序列。每一個目標基因有多條 sgRNA 選擇,因此必須先於體外篩選出效率較高的組別,再送入細胞內,如此可大幅提高成功機率。先以 PCR 放大出含作用位點的目標基因片段,大小約1000bp (圖二)。以 Cas9 enzyme 搭配不同的 sgRNA 反應,最後以 agarose gel 分析。如果 Cas9 enzyme 有成功作用,則會造成雙股 DNA 斷裂,於 agarose gel 中出現較小的片段 (圖三)。
圖二:GenCrispr sgRNA Screening Kit 作用示意圖 (#L00689)。先以 PCR 放大出含作用位點的目標基因片段 (約1000bp),以 Cas9 enzyme 反應後,最後以 agarose gel 分析。 圖三:目標基因分別加入11條不同的 gRNA,以 Cas9 nuclease 於37℃反應1小時,最後以 agarose gel分析。結果只有 gRNA9 有成功產生小片段 DNA。


3. GenCrispr Mutation Detection Kit:
此套組以 PCR & 電泳方式偵測細胞中 genomic DNA 上的突變。純化實驗細胞 genomic DNA 後,以 PCR 放大出含作用位點的目標基因片段,以適當的溫度作雜合 (hybridization),再以 T7E1 反應,最後以 agarose gel 分析。若 CRISPR 有成功作用且引發 NHEJ,則 T7E1 作用後會出現較小的 DNA 片段。



二、產品優點
三種套組,從 sgRNA 製備到篩選,最後到突變偵測,一應俱全。皆有詳細的實驗步驟可供參考。


三、產品資訊

表一:訂購資訊
產品名稱 GenCrispr sgRNA Synthesis Kit GenCrispr sgRNA Screening Kit GenCrispr Mutation Detection Kit
貨號 L00694 L00689 L00688
包裝 20 rxns 30 rxns 25 rxns
應用 sgRNA 製備:製備 sgRNA 的 DNA 模板,並進行體外轉錄 (IVT),製作出 sgRNA sgRNA 篩選:細胞轉染前,於體外快速篩選適合的 sgRNA 序列 DNA 突變偵測:以 PCR & 電泳方式偵測細胞中 genomic DNA 上的突變
內容物 tracrRNA DNA, T7 primer, DNA polymerase, control primer, T7 RNA polymerase, 兩種酵素 buffer Cas9 nuclease, buffer, control DNA & sgRNA DNA polymerase, T7E1, 兩種酵素 buffer, control DNA & primer