Kit (套組)-Molecular Biology-盟基生物科技股份有限公司

CRISPR

Kit (套組)

CRISPR

Kit (套組)

三種套組：sgRNA 製備、sgRNA 篩選以及 DNA 突變偵測！

CRISPR 被稱為第三代基因編輯技術，相較於先前的 TALEN 與 ZFN 系統而言，CRISPR 操作更簡單，且成功率更高。Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) and CRISPR-associated protein (Cas) 為細菌特殊的免疫系統，保護細菌免受病毒感染。CRISPR 技術是由 Cas9 蛋白質透過 gRNA 和目標基因的鹼基配對互補性，專一性結合目標基因染色體 DNA，並進行雙股裁切 (double strand break, DSB)。而發生 DSB 的染色體會以兩種方式修復，NHEJ (non-homologous end joining) 容易造成基因功能缺失 (knockout)，而 HDR (homology-directed repair) 引入 ssDNA template 則可以插入或置換特定序列 (knockin)。鹼基配對的特性使得 CRISPR 專一性更高，操作和設計更簡單，因此被廣泛應用於基因工程領域。Genscript 提供 CRISPR 三種套組，用於 sgRNA 製備、sgRNA 篩選以及 DNA 突變偵測。

一、產品介紹
1. GenCrispr sgRNA Synthesis Kit：
此套組用於製備含 T7 promoter 的 sgRNA DNA 模板，並進行體外轉錄 (in vitro transcription, IVT)，製作出 sgRNA。首先必須先以圖一的方式設計出 Target F1 primer 和 R1 primer，並透過 PCR 方式組合出 DNA template。最後以體外轉錄的方式製備出 sgRNA。

圖一：GenCrispr sgRNA Synthesis Kit (#L00694) 作用示意圖。實驗者必須先針對目標基因設計 Target F1 primer 和 R1 primer，並根據操作步驟組合出 DNA template。

2. GenCrispr sgRNA Screening Kit：
此套組用於細胞實驗前，於體外快速篩選適合的 sgRNA 序列。每一個目標基因有多條 sgRNA 選擇，因此必須先於體外篩選出效率較高的組別，再送入細胞內，如此可大幅提高成功機率。先以 PCR 放大出含作用位點的目標基因片段，大小約1000bp (圖二)。以 Cas9 enzyme 搭配不同的 sgRNA 反應，最後以 agarose gel 分析。如果 Cas9 enzyme 有成功作用，則會造成雙股 DNA 斷裂，於 agarose gel 中出現較小的片段 (圖三)。


圖二：GenCrispr sgRNA Screening Kit 作用示意圖 (#L00689)。先以 PCR 放大出含作用位點的目標基因片段 (約1000bp)，以 Cas9 enzyme 反應後，最後以 agarose gel 分析。	圖三：目標基因分別加入11條不同的 gRNA，以 Cas9 nuclease 於37℃反應1小時，最後以 agarose gel分析。結果只有 gRNA9 有成功產生小片段 DNA。

3. GenCrispr Mutation Detection Kit：
此套組以 PCR & 電泳方式偵測細胞中 genomic DNA 上的突變。純化實驗細胞 genomic DNA 後，以 PCR 放大出含作用位點的目標基因片段，以適當的溫度作雜合 (hybridization)，再以 T7E1 反應，最後以 agarose gel 分析。若 CRISPR 有成功作用且引發 NHEJ，則 T7E1 作用後會出現較小的 DNA 片段。

二、產品優點
三種套組，從 sgRNA 製備到篩選，最後到突變偵測，一應俱全。皆有詳細的實驗步驟可供參考。

三、產品資訊

表一：訂購資訊

產品名稱	GenCrispr sgRNA Synthesis Kit	GenCrispr sgRNA Screening Kit	GenCrispr Mutation Detection Kit
貨號	L00694	L00689	L00688
包裝	20 rxns	30 rxns	25 rxns
應用	sgRNA 製備：製備 sgRNA 的 DNA 模板，並進行體外轉錄 (IVT)，製作出 sgRNA	sgRNA 篩選：細胞轉染前，於體外快速篩選適合的 sgRNA 序列	DNA 突變偵測：以 PCR & 電泳方式偵測細胞中 genomic DNA 上的突變
內容物	tracrRNA DNA, T7 primer, DNA polymerase, control primer, T7 RNA polymerase, 兩種酵素 buffer	Cas9 nuclease, buffer, control DNA & sgRNA	DNA polymerase, T7E1, 兩種酵素 buffer, control DNA & primer

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