siRNA/miRNA-Gene Services-盟基生物科技股份有限公司

客製化抗體-盟基生物科技股份有限公司

siRNA/miRNA

siRNA/miRNA

Gene Service

siRNA/miRNA

siRNA, miRNA-短片段RNA用於RNAi

一、服務介紹
小片段、非編碼RNA在調節基因表達、誘導mRNA降解、改變細胞週期和決定細胞分化方面扮演著重要作用、已被廣泛證明與許多疾病的發展有關。
Synbio Technologies所提供的化學合成RNA服務即包含此類siRNA及miRNA。高質量服務和產品提供研究人員進行基因功能分析和治療策略開發。



二、服務優點
1. 皆使用 HPLC 純化,保證高純度。

2. 多種抑制方式可供選擇:siRNA, miRNA。

◎ siRNA有保證型方案: 保證抑制效果70%以上。
◎ miRNA有mimic和inhibitor可供選擇。


3. 多種不同修飾:方便追蹤和偵測。



三、服務方案
1. siRNA
使用siRNA的RNA干擾(RNAi)是削弱基因表達以研究各種細胞類型中蛋白質功能的最簡單和最有效的方法。
Synbio Technologies 提供標準雙鏈siRNA 以及化學修飾或螢光標記的 siRNA。可用的化學修飾包括磷酸骨架修飾、核糖修飾和鹼基修飾,可增加siRNA在體內的穩定性和持續時間,或增強鹼基的相互作用,促進標定目標mRNA的作用。

(1) 單條合成
A、標準siRNA:
Synbio Technologies標準的siRNA oligo 皆由 HPLC 純化,100% 除去尚未配對的單股 RNA,價格便宜,品質卓越。

B、化學修飾siRNA:
RNAi技術的最大難題在於化學合成siRNA 的穩定性問題。Synbio Technologies 所提供的化學修飾siRNA (2-OMe, Thiol, Chol, Biotin…等),有效延長細胞中的作用時間、亦可減少副作用。

C、螢光修飾siRNA:
Synbio Technologies可以多種不同螢光 (FAM, Cy5, Cy3…等)標記對siRNA末端進行標記,螢光標記後的 siRNA 可利用流式細胞儀、螢光顯微鏡或共聚焦顯微鏡等方式觀察,以確定轉染效率和優化轉染條件。螢光標記的siRNA還可應用於細胞內定位及雙標記分析實驗 (配合標記抗體),以追蹤轉染過程中導入了 siRNA的細胞,將轉染與目標蛋白表達之下游應用結合起來。  

D、siRNA對照組:
Synbio Technologies 提供三種siRNA對照控制組 :

1. 陰性對照組:通用陰性對照組 (negative control) 
siRNA 實驗必須要有陰性對照組,通用陰性對照組為與目的基因序列無同源性的通用型陰性對照。

2. 螢光標記的 (FAM) 的陰性對照組
與目標基因序列無同源性,可用於優化轉染條件和評估轉染效率。

3. 陽性對照組 (positive control)
陽性對照組於一個實驗系統很重要,當可觀察到siRNA陽性對照的預期實驗結果時,可確保於該實驗方法中,您的轉染試驗、RNA萃取物和檢測方法皆為有效。


(2) 保證型方案
您只需提供基因序列、Gene ID或者Accession number,Synbio Technologies即可設計合適的siRNA序列、針對目標基因提供三條siRNA,保證至少一條可達70%以上之抑制率,既可單獨使用又可隨意組合,以「siRNA Pool」形式提高抑制效率,並提供三種對照組,如下表。


siRNA保證型方案規格
內容 數量 規格
目標基因的siRNA 3對 2 OD x3
陰性對照組 1對 1 OD
FAM螢光標記的陰性對照組 1對 1 OD
陽性對照組 1對 1 OD

2. miRNA
miRNA是22個核苷酸的單鏈、小片段的非編碼RNA,通過抑制轉譯作用或促進目標mRNA的降解,作為內源性基因調節劑發揮重要作用。雖然miRNA的正常表達和功能對生理過程至關重要,但已證明miRNA的異常表達與各種癌症的發生密切相關。內源性miRNA的擾動有助於研究特定miRNA的功能。
Synbio Technologies提供廣泛的高質量miRNA合成產品,包括miRNA模擬體/抑制劑、agomir/antagomir和miRNA陰性對照等。


(1) miRNA mimics & inhibitors
miRNA mimics為根據成熟的microRNA (miRNA)序列設計的短片段RNA,用於模擬內源性的成熟miRNA。特異的miRNA mimics能夠被導入到細胞中,驗證miRNA與目標基因之間的調控關係。miRNA inhibitors為內源性miRNA 的antisense RNA,能夠被導入到細胞內,抑制內源性 miRNA的作用,也可以用來抑制外源性表達miRNA載體的表現。miRNA inhibitors經過甲基化修飾,使其結構更穩定、兩者皆適用於細胞。


(2) Agomir & Antagomir
Synbio Technologies 領先的核酸化學合成技術,推出miRNA mimics和inhibitors進階版,分別對應到agomir和antagomir。
◎ 兩者皆經過特殊標記與化學修飾,與細胞膜親和力更高,轉染效率與穩定性皆大幅提升。
◎ 干擾效果時間延長,最長可持續5-6週。
◎ 適用於in vivo 實驗,操作簡單方便。  

 
【註】 agomi & antagomir 之修飾如下:
(1) agomir在antisense RNA進行修飾:3'端進行膽固醇修飾;5'端兩個硫代骨架修飾 ;3'端四個硫代骨架修飾;全鏈甲基化修飾。
(2) antagomir:3'端進行膽固醇修飾;5'端兩個硫代骨架修飾;3'端四個硫代骨架修飾;全鏈甲基化修飾。

(3) miRNA negative control
一個完整的實驗設計,皆必須包含陰性對照組,其目的在於監測實驗中的實驗條件與操作是否正確,並可以此對實驗進行優化。