VHH Antibody Discovery-盟基生物科技股份有限公司

VHH Antibody Discovery

Antibody Generation

VHH Antibody Discovery

來自羊駝的單株抗體

VHH Antibody是來自於heavy chain antibody (通常簡稱為HcAb)上的可變區，是極具應用價值的抗體形式，可以應用在學術研究、臨床診斷、治療性抗體開發與細胞治療。駱駝科動物是自然界中，會生產heavy chain antibody的物種之一，在我們的服務主要是以羊駝來當作來源物種，與General IgG相比，HcAb是由兩條重鏈所組成，具有分子量更小的優勢。

一、服務介紹

原廠作為全球領先的客製化抗體製造商，有專業、成熟的研發團隊，已經成立10年以上，從2012~2022年成功交付了超過7萬條重組抗體給世界各地的客戶。原廠自2019年開始提供VHH Antibody單株抗體服務，擁有成熟的技術，具有高通量篩選平台，從羊駝動物免疫、B細胞分離、B細胞定序、篩選平台到抗體生產，幫助客戶取得高特異性與高親和力的抗體。

圖一：General IgG與HcAb的構型差異

為什麼要選擇羊駝單株抗體?

1. 分子量小，只有15KDa
缺少Fc region而可以直接穿透血腦屏障，結合到抗原的各個位置，且容易進入酵素的空腔或活性區，常常可識別不常見或隱藏的表位

2.溶解度高
與General IgG相比，雖然說scFv也很小，但是可能會遇到親水性不佳的情形，因為中間有個人工合成的鍵結；至於Fab的話分子量又更大了，並無法穿透血腦屏障

3. 易於生產、結構穩定
因為內部具有非典型雙硫鍵，讓VHH Antibody具有高抗熱性和強化學穩定性，更容易應用於蛋白質工程與藥物開發

二、服務優點

1.自有的羊駝養殖場，每隻羊駝只會使用於一個項目，絕不重複
擁有100隻以上的羊駝，飼養環境符合動物福祉

2.最少提供20株特異型抗體序列
保證型服務，原廠具有豐富的經驗可在服務過程中解決各式突發狀況

3.原廠具有高通量篩選平台
透過二次免疫、三次免疫、四次免疫產生多樣性及具有高產能的抗體

三、服務項目
圖二：客製化羊駝單株抗體之製造流程

表一：客製化羊駝單株抗體之服務流程

階段		服務內容	時程	交貨規格
I	動物免疫	至少兩隻羊駝，每次免疫結束後3-5天採血，對血清進行ELISA效價檢測	6-8週	客戶可根據ELISA效價決定要使用二次免疫、三次免疫、四次免疫的血液
II	收集PBMC	每隻羊駝抽取50ml血液並分離PBMC(內含有B細胞)	2-3天	細胞數大於5 x 107
III	分離B細胞	分離出有與目標抗原結合的B細胞	一週
IV	高通量平台篩選(定序)	1.建構VHH展示庫 2.根據結合力與親和力檢測 3.挑選出20個不同的序列	2-3週	提供平台檢測數據結果(可根據方案選擇篩選的細胞數)
V	抗體表達與鑑定	1. 提供SDS-PAGE>95%、SEC-HPLC、内毒素<1EU/mg 2. ELISA結合檢測 3. Biacore Full KD 4. FACS檢測 5. 其他客製化需求	2-3週	1.依客戶的需求選擇不同的方式鑑定 2.交付0.5-1mg抗體 3.至少20個以上序列

四、服務方案

表二：客製化羊駝單株抗體方案

方案		1.Basic	2.Gold	3.Platinum
	Starting Material	Soluble Protein	• Soluble Protein • Over-expression Cell Line (Immunization & Detection)	• DNA • Over-expression Cell Line (Immunization & Detection)
Phase I	Alpaca Immunization	Soluble Protein	Soluble Protein + Cells	DNA + Cells
Phase II	PBMC Collection	>5x10^7 Cells	>5x10^7 Cells	>5x10^7 Cells
Phase III	Plasma B Cell Sorting	V	V	V
Phase IV	High-throughput Expression Screening	V	V	V
	VHH Expression (SDS-PAGE>95, SEC-HPLC, Endotoxin level<1 EU/mg)	20 VHH, 0.5-1mg/Ab	50 VHH, 0.5-1mg/Ab	50 VHH, 0.5-1mg/Ab
	ELISA binding test	V	V	V
	Biacore Full KD	Optional	V	Optional
	FACS	Optional	V	V
Guarantee		20+ Unique Sequences	20+ Unique Sequences (affinity>10^-9), at least 5 Unique Sequences (recognizing Mouse, Cyno and Human)	20+ Unique Sequences, at least 5 Unique Sequences (recognizing Mouse, Cyno and Human)

五、案例分享
CD3 VHH Antibody screening
a.確保抗原有效能引發免疫反應，並根據抗體效價進行3-4次動物免疫

b.通過高通量篩選平台，將ELISA吸光值(OD450>0.5)視為positive clone，藉此挑選出至少20條特異性抗體序列

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