VHH Antibody Discovery-盟基生物科技股份有限公司

客製化抗體-盟基生物科技股份有限公司

VHH Antibody Discovery

VHH Antibody Discovery

Antibody Generation

VHH Antibody Discovery

來自羊駝的單株抗體

VHH Antibody是來自於heavy chain antibody (通常簡稱為HcAb)上的可變區,是極具應用價值的抗體形式,可以應用在學術研究、臨床診斷、治療性抗體開發與細胞治療。駱駝科動物是自然界中,會生產heavy chain antibody的物種之一,在我們的服務主要是以羊駝來當作來源物種,與General IgG相比,HcAb是由兩條重鏈所組成,具有分子量更小的優勢。

一、服務介紹

原廠作為全球領先的客製化抗體製造商,有專業、成熟的研發團隊,已經成立10年以上,從2012~2022年成功交付了超過7萬條重組抗體給世界各地的客戶。原廠自2019年開始提供VHH Antibody單株抗體服務,擁有成熟的技術,具有高通量篩選平台,從羊駝動物免疫、B細胞分離、B細胞定序、篩選平台到抗體生產,幫助客戶取得高特異性與高親和力的抗體。


圖一:General IgG與HcAb的構型差異


為什麼要選擇羊駝單株抗體?

1. 分子量小,只有15KDa

缺少Fc region而可以直接穿透血腦屏障,結合到抗原的各個位置,且容易進入酵素的空腔或活性區,常常可識別不常見或隱藏的表位

2.溶解度高
與General IgG相比,雖然說scFv也很小,但是可能會遇到親水性不佳的情形,因為中間有個人工合成的鍵結;至於Fab的話分子量又更大了,並無法穿透血腦屏障

3. 易於生產、結構穩定
因為內部具有非典型雙硫鍵,讓VHH Antibody具有高抗熱性和強化學穩定性,更容易應用於蛋白質工程與藥物開發

 

二、服務優點

1.自有的羊駝養殖場,每隻羊駝只會使用於一個項目,絕不重複
擁有100隻以上的羊駝,飼養環境符合動物福祉

2.最少提供20株特異型抗體序列
保證型服務,原廠具有豐富的經驗可在服務過程中解決各式突發狀況

3.原廠具有高通量篩選平台
透過二次免疫、三次免疫、四次免疫產生多樣性及具有高產能的抗體



三、服務項目
圖二:客製化羊駝單株抗體之製造流程 



表一:客製化羊駝單株抗體之服務流程

階段 服務內容 時程 交貨規格
I 動物免疫 至少兩隻羊駝,每次免疫結束後3-5天採血,對血清進行ELISA效價檢測 6-8週 客戶可根據ELISA效價決定要使用二次免疫、三次免疫、四次免疫的血液
II 收集PBMC 每隻羊駝抽取50ml血液並分離PBMC(內含有B細胞) 2-3天 細胞數大於5 x 107
III 分離B細胞 分離出有與目標抗原結合的B細胞 一週  
IV 高通量平台篩選(定序) 1.建構VHH展示庫
2.根據結合力與親和力檢測
3.挑選出20個不同的序列
2-3週 提供平台檢測數據結果(可根據方案選擇篩選的細胞數)
V 抗體表達與鑑定 1. 提供SDS-PAGE>95%、SEC-HPLC、内毒素<1EU/mg
2. ELISA結合檢測
3. Biacore Full KD
4. FACS檢測
5. 其他客製化需求
2-3週 1.依客戶的需求選擇不同的方式鑑定
2.交付0.5-1mg抗體
3.至少20個以上序列



四、服務方案

表二:客製化羊駝單株抗體方案
方案 1.Basic 2.Gold 3.Platinum
  Starting Material Soluble Protein • Soluble Protein
• Over-expression
Cell Line (Immunization & Detection)
• DNA
• Over-expression
Cell Line (Immunization & Detection)
Phase I Alpaca Immunization Soluble Protein Soluble Protein + Cells DNA + Cells
Phase II PBMC Collection >5x10^7 Cells >5x10^7 Cells >5x10^7 Cells
Phase III Plasma B Cell Sorting V V V
Phase IV High-throughput Expression Screening V V V
  VHH Expression
(SDS-PAGE>95, SEC-HPLC, Endotoxin level<1 EU/mg)
20 VHH, 0.5-1mg/Ab 50 VHH, 0.5-1mg/Ab 50 VHH, 0.5-1mg/Ab
  ELISA binding test V V V
  Biacore Full KD Optional V Optional
  FACS Optional V V
Guarantee 20+ Unique Sequences 20+ Unique Sequences (affinity>10^-9), 
at least 5 Unique Sequences
(recognizing Mouse, Cyno and Human)
20+ Unique Sequences, at least 5 Unique
Sequences (recognizing Mouse, Cyno and Human)



五、案例分享
CD3 VHH Antibody screening
a.確保抗原有效能引發免疫反應,並根據抗體效價進行3-4次動物免疫



b.通過高通量篩選平台,將ELISA吸光值(OD450>0.5)視為positive clone,藉此挑選出至少20條特異性抗體序列