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Antibody Generation
Recombinant antibody production
VHH Antibody Discovery
一、服務介紹
VHH (VH derived from heavy chain antibodies)來自於HcAb (heavy chain antibody)上的可變區,構型有別於一般IgG或其衍生的抗體形式(Figure 1),而駱駝科動物是自然界中,會生產 heavy chain antibody 的物種之一。
VHH特色
✓ 分子量很小,只有15KDa
✓ 溶解度高
✓ 結構穩定
✓ 易於生產
✓ 可識別不常見或隱藏的表位
✓ 容易進入酵素的空腔或活性區
✓ 可穿透血腦屏障
✓ 更容易應用於蛋白質工程與藥物開發
二、服務應用
VHH可應用於學術研究、臨床診斷、治療性抗體開發與細胞治療,應用方面極廣,可以說是抗體界的明日之星! A.學術研究:活體影像追蹤、免疫染色。 B.臨床治療❶:治療性抗體、細胞治療。 B.臨床治療❷:攜帶藥物至特定細胞/組織釋放。 C.臨床診斷:Biomarker、IVD試劑開發。
三、服務項目:VHH篩選平台
盟基的合作廠商在羊駝單株抗體開發已有超過 10 年的經驗,根據不同的實驗規模與需求,可以提供兩種抗體篩選平台- Animal Immunization & Naïve Library Screening ,客戶可以選擇最符合需求的方式進行,比較優缺點如下方表格:
羊駝抗體篩選平台 特色比較 Animal immunization Naïve library screening 羊駝物種 Alpaca Alpaca 時間(不含抗原製備) 4~5 months 6~10 weeks (勝!) 抗體親和力 較佳 (勝!) 較差~ 中等
1. 篩選平台- Animal immunization
每一隻羊駝只用於單一項目,以成熟的phage display 技術與高通量篩選平台,為客戶提供最專業的客製化生產抗體服務。
(1) 服務保證
1. 自有羊駝養殖場,每隻羊駝只使用於一個項目,絕不重複
2. 最少提供20株特異性抗體序列
3. 獨家的高通量篩選平台,提供多樣性&高產能
4. 抗體品質: in vivo 等級重組抗體
服務流程
(2) 案例分享
Anti-human CD3 VHH antibody screening
動物免疫後利用高通量篩選平台,將500 個clones 用ELISA 的方式篩選,最終挑選出100 多條特異性抗體序列,陽性篩選比例高達23.1%。
2. 篩選平台- Naïve library screening
使用已構建好的naïve VHH phage library,不需要經過動物免疫,直接進入biopanning & screening 步驟,快速得到羊駝抗體。
(1) 服務優勢
1. 交期短:跳過動物免疫直接進行抗原篩選(6~10 週)
2. 方案彈性佳:可自行選購定序與生產的抗體個數
3. Library 多樣性大: 容量>10⁹
4. 成功率高: 目前累計有近30個羊駝抗體的成功案例
服務流程Antibody Discovery by Phage Display Specifications Timeline Deliverables 1.1 Protein expression A.Gene synthesis and carrier construction
B.Protein Expression Evaluation
C.Protein expression and purification4 weeks 1. 4μg expression plasmid 2. 100μg protein 1.2 Library screening and biopanning A.Screening of the naïve Alpaca VHH library (4-6 rounds of biopanning) 2-3 weeks 3. Progress report 1.3 ELISA screening A.Screening and validation by ELISA until at least 3-10 different clones are identified 1 week 4. Progress report 1.4 DNA extraction and antibody sequencing (Alternative) A.Phage DNA extraction and antibody sequencing 1-2 weeks 5. Progress report
6. DNA sequence of the best clones1.5 Antibody expression (Alternative) A.Expression the selected clones by E.coli 2-4 weeks 7. 500ug Antibody per clone 8. Progress report
(2) 案例分享
Anti- GFP VHH antibody in the IP application:
將Anti-GFP VHH antibody 連接磁珠後,與GFP overexpressed-293 cell 反應,比較其免疫沉澱效果。