Fluorometric protein quantitation assay-客製化抗體-盟基生物科技股份有限公司

Protein Quantitation

Fluorometric protein quantitation assay

Fluorometric protein quantitation assay

Protein Quantitation

Fluorometric protein quantitation assay

AccuOrange蛋白質定量套組

一、產品介紹

進行任何與蛋白質相關試驗時,例如:SDS-PAGE、protein engineering、Western、ELISA與Mass等,需要一致的蛋白質濃度規格才能控管實驗的品質,為相當重要的分析參數之一,不論是在生化、生物技術、醫學分析、製藥、食品或化妝品工業等,蛋白質定量為基本的例行性程序。而定量蛋白質的方法有許多,每一種方法皆有其特點與應用,例如:(1) 凱氮法:分析結果雖為最精確但操作複雜,不適用於大批樣品的測試,為分析化學與食品分析常見之蛋白定量方法。(2) 雙縮尿素法,其操作簡單且結果之線性佳,但靈敏度差、樣品需求量大且測量範圍窄,因此在科研上的應用備受限制。(3) 科研上常以測光度法 (photometric)進行蛋白質定量,可藉由已知濃度的蛋白質標準品之吸光值,來測定未知濃度之蛋白質樣本(表一)。Biotium為全球知名螢光染劑製造商,Biotium所生產的試劑獲得許多國際知名大廠認可,例:Sigma-Aldrich、BioRad、Qiagen、BD Biosciences與EMD Millipore等,並與許多學術研究人員合作開發新一代的螢光技術,來滿足研究人員的不同需求。Biotium針對蛋白質定量研發出AccuOrange蛋白定量套組。

表一:AccuOrange對不同化學物質之耐受性
化合物 最高承受濃度(final con. in assay)
SDS 0.0001
Triton X-100 Below 0.001%
Tween 20 Below 0.001%
CHAPS Below 0.001%
Sodium deoxycholate (DOC) Below 0.001%
Urea 10 mM
DTT 100 mM
bME 0.001
Ammonium sulfate 1 mM
Sodium azide 2 mM
Imidazole 50 mM
DNA 10ug/mL
EDTA 1mM
Sucrose 10 mM (0.34%)
Glycerol 0.01
PBS 0.02X
NaCl 1 mM
CaCl2 0.01 mM
MgCl2 0.2 mM
ZnCl2 0.2mM
Tris 1 mM
Glycine 100 mM
Amino acids 10 ug/mL



二、產品說明

AccuOrange蛋白定量套組為高度敏感型螢光分析試劑,可於96孔盤中定量已純化好的蛋白質 (Ex/Em=480/598 nm)。其偵測蛋白濃度範圍為0.1-15ug/ml。比起傳統定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析,AccuOrange蛋白定量套組之敏感性更佳,此外,其線性以及再生性皆更優異。AccuOrange蛋白定量套組可顯示在不同蛋白質之間的最小變異性,且螢光訊號穩定長達16小時;其受測樣本不論為純化蛋白或抗體皆適用,客製化抗體而其適用機型為AccuLiteTM470 Mini Fluorometer。需特別注意的是,AccuOrange對鹽類、緩衝液、detergent或是其他化學物質都有不同程度的耐受性(表二)。

表二:比較不同蛋白質定量分析
蛋白質定量種類 偵測範圍 偵測方式 與reducing agent是否相容 與detergent是否兼容 訊號穩定 其他
AccuOrange 0.1-15 ug/mL 螢光(480/598nm) V X X(長達16hr) 高線性
NanoOrange 0.1-10 ug/mL 螢光(470/578nm) V X 非線性
Modified Lowry 1-1500 ug/mL 可見光(750nm) X X - 非線性
BCA 20-2000 ug/mL 可見光(562nm) X V X 高線性
Bradford (Commassie) 50-500 ug/mL 可見光(595nm) V X X 非線性
Pierce 660nm 50-2000 ug/mL 可見光(660nm) V V - 非線性
A280 可見光(280nm) - - - 蛋白差異性高;
核酸汙染影響結果


三、產品特色

1. 高靈敏度:可偵測蛋白濃度範圍0.1-15 ug/mL
2. 蛋白之間差異小
3. 高線性結果
4. 螢光訊號穩定長達16小時
5. 可使用於含有reducing agent、nucleic acid、amino acid與imidazole之蛋白樣品


四、實驗論證

AccuOrange比NanoOrange有更佳的線性與再現性

利用BSA標準溶液做為測試樣本並進行三重複,分別參照AccuOrange與NanoOrange之建議步驟進行蛋白定量分析。不論是在BSA濃度測試範圍從0-1.5 ug/ml或0-15 ug/ml,皆可發現AccuOrange比NanoOrange有較低的的曲線結果,且三重複的再現性佳。



五、保存條件

室溫保存長達至少一年

 

六、訂購資訊

貨號  品名 包裝
30071-T AccuOrange Protein Quantitation Kit 200 assays
30071 2000 assays